Les virus Influenza de type A remodèlent les membranes du réticulum endoplasmique et y mobilisent la GTPase RAB11A associée à une machinerie de synthèse de PI4P. A. Des cellules A549 ont été infectées ou non pendant 8 heures avec le virus A/WSN/33 (à une multiplicité d’infection de 5 PFU¹/cellule), puis fixées et immunomarquées pour révéler les protéines cellulaires RTN3 (présente dans les tubules du réticulum endoplasmique et CLIMP63 (présente dans les feuillets du réticulum endoplasmique). Les noyaux ont été marqués par le DAPI (en bleu). Barre d’échelle : 10 µm. B. Des cellules A549, préalablement traitées avec un petit ARN interférent (small interfering RNA, siRNA) spécifique de RAB11A (siRAB11A) ou avec un siRNA témoin (Témoin), ont été infectées ou non pendant 8 heures avec la souche A/WSN/33 du virus influenza A, puis fixées et immunomarquées pour les protéines CLIMP63 et NP (nucléoprotéine virale, un composant majeur des complexes ribonucléoprotéiques viraux). Les noyaux ont été marqués par le DAPI (en bleu). Barre d’échelle : 10 µm. Les intensités de fluorescence associées ont été mesurées le long de la ligne jaune à partir du cercle, et indiquent une association plus étroite entre les feuillets du réticulum endoplasmique (CLIMP63⁺) et les complexes ribonucléoprotéiques viraux (NP⁺) en absence de RAB11A. C. RAB11A a été fusionnée à une biotine ligase (TurboID), ce qui permet de biotinyler les protéines voisines dans un rayon d’environ 10 nm. D. Identification, par spectrométrie de masse, des protéines biotinylées dans des cellules A549 produisant la protéine de fusion TurboID-RAB11A, infectées ou non par le virus A/WSN/33. Le graphique indique que les protéines liées au métabolisme des phosphoinositides (PI) ne sont identifiées que dans les cellules infectées (R1-R4 indiquent 4 répétitions indépendantes de la même expérience). E. Le phosphatidylnositol-4-phosphate (PI4P) peut être synthétisé par plusieurs voies métaboliques impliquant la phosphorylation du phosphatidylinositol (PI) par les enzymes de type kinase PI4K (incluant FAM126A), ou la déphosphorylation du phosphatidylinositol-4,5-biphosphate (PI4,5P2) par l’enzyme phosphatase INPP5K (Figure adaptée de [8]).

¹ Plaque-forming unit : unité de formation de plaque, correspondant à une unité infectieuse capable de former une plage de lyse sur un tapis cellulaire.