Tri des cellules sénescentes par cytométrie en flux - Des spécificitéset des pièges à éviter

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Tableau I.

Description et utilisation des substrats fluorigènes de la b-Gal pour le marquage et le tri de cellules sénescentes par cytométrie en flux. *Exc./Em. : Excitation/émission ; **C₁₂FDG : 5-dodecanoylaminofluorescéine di-β-D-galactopyranoside ; ***DDAOG : 9H-(1, 3-dichloro-9, 9-diméthylacridine-2-one-7-yl) β-D-galactopyranoside

Substrats fluorigènes de la β-Gal	Structure moléculaire	Exc./Em.*(nm)	Considérations d’utilisation
**C₁₂FDG		497/518  (laser 488/ canal FITC)	Nécessité de tester les temps d’incubation pour marquer les cellules sénescentes en fonction du type de cellules étudiées (le temps minimal d’incubation est de 1 heure). Les substrats C₁₂FDG et DDAOG génèrent un signal de sensibilité et spécificité comparables. La présence de lipofuscine dans les cellules sénescentes entraîne une autofluorescence détectable aussi bien par le canal FITC que par le canal APC (Figure 5A). Le produit DDAO est détectable sur le canal APC, ce qui permet de réaliser un double marquage sur le canal FITC sans compensation ; de plus, le DDAO supporte la fixation L’utilisation du substrat DDAOG permet d’utiliser l’autofluorescence de la lipofuscine dans le canal FITC comme un marqueur additionnel de sénescence (Figure 5B)
***DDAOG		646/659 (laser 640/ canal APC)

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