Les différentes méthodes utilisées pour générer des organoïdes sécréteurs d’insuline. Les organoïdes sécréteurs d’insuline sont obtenus après dissociation enzymatique des îlots de Langerhans isolés. Les cellules obtenues sont ensuite réagrégées. Pour cela, différentes techniques peuvent être employées. A. La réagrégation spontanée de cellules d’îlots en suspension dans un support de culture non adhérent forme des pseudo-îlots de tailles variables. B. Le recours à la culture cellulaire en rotation (CRCT), durant laquelle un mouvement de rotation (symbolisé ici par la flèche verte) est appliqué à la suspension cellulaire tout au long du processus de réagrégation, favorise la réagrégation cellulaire et forme des organoïdes de diamètre plus élevé. C. La technique des microgouttes inversées utilise la tension de surface des gouttes pour concentrer les cellules ensemencées au fond des gouttes. Cette technique permet de contrôler le nombre de cellules désiré dans les organoïdes et donc leur taille. D. La conception de micro-puits dans les supports de culture (soit par utilisation de micro-moules d’agarose, soit des plaques de culture contenant déjà des micro-puits dès leur fabrication) repose sur le même principe que celui des microgouttes inversées en concentrant les cellules dans des puits de petit volume, et permet de maitriser la taille des organoïdes générés. Cependant, cette méthode comporte de multiples avantages par rapport à celle des microgouttes : la possibilité de centrifuger les cellules après ensemencement pour accélérer leur sédimentation au fond des micro-puits et ainsi diminuer le risque de perte cellulaire, la possibilité de renouveler le milieu de culture, ainsi que la facilité de manipulation et le gain de temps de ces supports permettent d’appliquer cette méthode à grande échelle.