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Tableau II.
Études comparatives de la qualité analytique (propriétés physico-chimiques) et fonctionnelles (activité biologique / pharmacologique): anticorps de références vs biosimilaires (d’après [21-23]).
| Caractéristiques | Techniques analytiques | Paramètres analysés |
|---|---|---|
| Caractérisation physico-chimique | ||
| Propriétés générales | Ultra-violets à 280 nm | Teneur en protéines |
| pH, osmolalité, concentration en surfactant | ||
| Apparence, couleur, clarté | ||
| Structure primaire | Analyse de la protéine intacte par chromatographie en phase liquide – spectrométrie de masse (LC-MS) | Masse moléculaire de la protéine intacte |
| Analyse des sous-unités protéiques par LC-MS | Masse moléculaire des LC et HC réduites, déglycosylées/glycosylées | |
| Carte peptidique par LC-MS/MS | Séquence protéique (carte peptidique après réduction) Structure des ponts disulfures (carte peptidique sans réduction) Masse moléculaire de la protéine intacte Masse moléculaire des LC et HC réduites, déglycosylées/glycosylées Niveau de glycation | |
| Focalisation isoélectrique capillaire par image (icIEF) | Point isoélectrique | |
| Chromatographie + réaction ninhydrine | Composition en acides aminés | |
| Modifications post-traductionnelles enzymatiques (glycosylation) | Carte peptique/glycopeptidique par LC-MS/MS | Site d’occupation des N-glycanes |
| Chromatographie d’interaction hydrophile (HILIC)-MS/MS | Identification des N-glycanes | |
| HILIC-FD (2-AB) | Profilage des N-glycanes | |
| Électrophorèse capillaire de zone (CZE) - fluorescence induite par laser (LIF) (APTS) | Profilage des N-glycanes | |
| Structures d’ordres supérieurs | Dichroïsme circulaire | Structures secondaire et tertiaire |
| Spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier (FTIR) | Structure secondaire | |
| Fluorescence (intrinsèque) | Structure tertiaire | |
| Calorimétrie différentielle à balayage (DSC) | Propriétés thermodynamiques, stabilité thermique, identification des transitions thermiques | |
| Particules et agrégats | Chromatographie d’exclusion stérique (SXC) | Variants de taille de haut poids moléculaire (HMWS) et de bas poids moléculaire (LMWS) |
| Diffusion dynamique de la lumière (DLS) | Particules submicroniques | |
| Fractionnement par couplage flux-force asymétrique (A4F)-LS | Particules submicroniques | |
| Ultracentrifugation analytique (AUC) | Profil des agrégats | |
| Obscuration de la lumière (LO) | Particules sub-visibles | |
| Substances apparentées et impuretés | SEC - conditions natives | Variants de taille |
| Electrophorèse capillaire sur gel en milieu dénaturant (CGE-SDS) | Variants de taille | |
| Chromatographie d’échange de cations (CEX) Focalisation isoélectrique capillaire par image (icIEF) | Variants de charge, distribution des isoformes (déamidation, isomérisation, parties terminales N/C) | |
| Substances apparentées et impuretés | Carte peptidique par LC-MS/MS | Variants de charge, distribution des isoformes (déamidation, isomérisation, parties terminales N/C) |
| Oxydation | ||
| Impuretés des cellules-hôtes | ELISA 2D-LC-MS (avec chromatographie d’affinité) | Protéines de cellules-hôtes |
| qPCR | ADN résiduel | |
| Caractérisation biologique | ||
| Liaison du Fab et activité | ELISA, Résonance plasmonique de surface (SPR) | Affinité antigène-anticorps |
| Tests cellulaires | Cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC), cytotoxicité dépendante du complément (CDC), phagocytose dépendante des anticorps (ADCP) | |
| Liaison de la région du Fc | SPR Tests cellulaires | Interactions avec C1q, RFcγIIIa-V/F, RFcγIIIb, RFcγIIa, RFcγIIb, FcRn |
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