Exemples d’applications biologiques de l’électroporation in vivo. A. Expression d’une construction portant le gène lacZ sous le contrôle d’un élément régulateur murin du gène Hoxb9 spécifique du tube neural. A gauche, un embryon de souris de 9,5 jpc, dans lequel cette construction a été njectée par transgenèse dans le pronucléus de l’œuf fécondé. L’ADN est intégré au hasard dans le génome et de manière stable. A droite, un embryon de poulet qui a reçu la même construction dans le tube neural par électroporation au stade 8 somites. Dans ce cas, l’ADN n’est pas intégré au génome et l’expression est transitoire. Dans les deux organismes, l’élément régulateur dirige l’expression du gène lacZ spécifiquement dans la partie postérieure du tube neural. B. Utilisation d’un mutant dominant négatif. Une construction exprimant une forme mutée du récepteur RARa1 de xénope (dnRARa1) a été électroporée dans la partie gauche du tube neural d’un embryon de poulet au stade HH9 (8 somites). L’ embryon a été prélevé au stade HH14 (25 somites) pour analyser l’expression du gène Hoxb4 par hybridation in situ. La présence de cette construction, qui bloque la voie de signalisation par l’acide rétinoïque, empêche l’induction de Hoxb4 (noter l’absence d’expression de Hoxb4 dans la partie gauche du tube neural). C. Expression de la ß-galactosidase après électroporation dans l’embryon murin. Vue dorsale d’un embryon de 9,0 jpc exprimant la ß-gal dans le cerveau antérieur. L’ADN (CMV-lacZ) a été injecté dans la cavité amniotique d’embryons de 8,0 jpc et les embryons ont été cultivés 12 heures in vitro après électroporation (25 volts/50 ms) (image gracieusement fournie par N.Itasaki, NIMR, Londres). D. Expression d’une GFP à localisation nucléaire dans le tube neural de l’embryon de poulet. Une solution d’ADN à 4mg/ml a été déposée dans la région caudale d’un embryon de poulet de 12 somites (promoteur ß-actine/CMV; 4 chocs de 25 volts/50 ms). Les embryons ont été prélevés après 36h et analysés en microscopie confocale (image gracieusement fournie par Luc Mathis, Institut Pasteur). S : somite ; TN : tube neural ; C : cœur.