Méthodes fondées sur la levure d’identification des cibles de composés (sondes) isolés dans des criblages pharmacologiques phénotypiques. Quatre méthodes génétiques de profilage de composés actifs sont présentées dans cette figure. A. Profilage de souches diploïdes haplo-insuffisantes chacune pour un des ~ 2 000 gènes de levure qui sont essentiels (donc pour lesquelles le dosage génique pour le gène considéré est d’environ 50 %). Cette méthode permet de repérer les gènes essentiels dont l’haplo-insuffisance conduit à une hypersensibilité au composé étudié, donc codant probablement des cibles de ce dernier. B. Profilage de souches haploïdes chacune délétée d’un des ~ 4 000 gènes de levure non-essentiels (donc pour lesquelles le dosage génique pour le gène considéré est de 0 %). Cette méthode permet l’identification de tous les gènes non-essentiels dont l’inactivation totale conduit à une sensibilité accrue au composé d’intérêt, donc potentiellement impliqués dans la résistance à ce dernier. C. Profilage de souches de levure surexprimant chacune un des ~ 6 000 gènes de levure (donc pour lesquelles le dosage génique pour le gène considéré est >100 %). Cette méthode permet d’identifier tous les gènes dont la surexpression confère une résistance au composé étudié et donc codant des cibles potentielles de ce dernier. Il est important de noter que ces trois méthodes sont fondées sur la toxicité générale de la molécule considérée pour la levure (puisque le paramètre mesuré est l’effet du composé sur la croissance des souches de levures), et donc sur l’inférence que son effet toxique implique les mêmes cibles cellulaires que sa capacité à modifier le phénotype pathologique, ce qui n’est pas nécessairement le cas. D. L’approche triple-hybride (3H) est fondée sur la création d’une chimère entre la sonde étudiée et une autre petite molécule dont la cible est connue (par exemple l’interaction méthotrexate/dihydrofolate réductase, DHFR). Une étude structure-activité préalable est nécessaire afin de contrôler si la sonde fonctionnalisée est toujours biologiquement active. L’approche triple-hybride est fondée sur l’utilisation de banques de levure exprimant des fusions protéiques entre un domaine d’activation de la transcription (AD) et les protéines cibles à tester d’une part, et, d’autre part, la fusion entre la DHFR et un domaine de liaison à l’ADN (DBD) d’un facteur de transcription. Les levures sont ensuite traitées avec la sonde fonctionnalisée. Seules les levures exprimant la cible de la sonde pourront se développer sur un milieu dépourvu d’histidine (+), dans cet exemple de gène rapporteur.