Figure 3.

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Modèle de BHE développé au laboratoire LBHE à partir de cellules souches hématopoïétiques issues de sang de cordon ombilical. En accord avec la législation française et avec le consentement des parents des donneurs, le sang de cordon ombilical est prélevé et centrifugé. Le « buffy coat » composé des cellules leucocytaires est prélevé puis de nouveau centrifugé en gradient de Ficoll. Le marqueur membranaire CD34+ est ensuite utilisé afin d’isoler les cellules souches hématopoïétiques par la technique de billes magnétiques (MACS®). Ces cellules expriment également les marqueurs CD45 et CD31, spécifiques respectivement des cellules hématopoïétiques et endothéliales. Les cellules CD34+ purifiées sont ensuite cultivées 15 à 20 jours comme décrit précédemment [51]. À la fin de cette étape, le phénotype de cellules endothéliales est acquis et validé par l’expression du facteur von willebrandt (vWF) et du récepteur 2 du VEGF (vascular endothelial growth factor) (KDR pour kinase insert domain receptor). Dès lors, les cellules sont amplifiées afin de permettre de mener de nombreux projets avec les mêmes fonds génétiques. Les cellules peuvent être congelées pour utilisation ultérieure ou pour envoi aux collaborateurs qui souhaitent les utiliser dans leur laboratoire. Lors de la décongélation, elles sont ensemencées en co-culture avec des péricytes cérébraux. Après 6 jours de co-culture, les cellules endothéliales ont acquis les propriétés des cellules endothéliales cérébrales et sont ainsi appelées brain-like endothelial cells (BLEC) [12].
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