L’activité endonucléase de l’ARN polymérase du virus de la grippe est portée par le domaine PA-Nter. A. Structure tridimensionnelle du domaine PA-Nter. Les résidus formant le site actif sont annotés en fonction de leur position. B. Activité endonucléase manganèse-dépendante du domaine PA-Nter. Pour toutes les lignes, les concentrations en ARN, en protéine (PA-Nter) et en manganèse sont constantes, seul le temps de réaction varie entre les lignes 4 et 8 (respectivement 5, 10, 20, 40 et 80 minutes). La réaction est arrêtée par l’ajout d’EGTA (ethylene glycol tetraacetic acid) à une concentration finale de 1 mM. La ligne 1 correspond à l’ARN mis en présence de PA-Nter seul, la 2, l’ARN en présence de manganèse seul, la 3, l’ARN en présence de PA-Nter + manganèse + EGTA. C. Formule topologique de l’acide 2,4 dioxo-4-phénylbutanoïque. D. Inhibition de l’activité endonucléase de PA-Nter par l’acide 2,4 dioxo-4-phénylbutanoïque. Les concentrations du domaine PA-Nter, de l’ARN et du manganèse restent constantes. Les réactions se déroulent sur 40 minutes, seule la concentration en inhibiteur augmente entre la ligne 2 et la ligne 9 (respectivement 0, 6.5, 13, 20, 26, 40, 65, 130 µM). Un témoin de digestion a été réalisé en incubant l’ARN avec 1 mM de manganèse (ligne 1).