Tri des cellules sénescentes par cytométrie en flux

Des spécificitéset des pièges à éviter

Sorting of senescent cells by flow cytometry: Specificities and pitfalls to avoid

¹ Univ. Lille, CNRS, Inserm, CHU Lille, UMR9020-U1277 - CANTHER ( Cancer Heterogeneity Plasticity and Resistance to Therapies ), F-59000 Lille, France
² Univ. Lille, CNRS, Inserm, CHU Lille, Institut Pasteur de Lille, US41 – UAR 2014 – PLBS, F-59000 Lille, France
³ Univ. Lille, Inserm, CHU Lille, Institut Pasteur de Lille, U1011 - EGID, F-59000 Lille, France

^* corinne.abbadie@cnrs.fr

Résumé

La sénescence est un état d’adaptation des cellules au stress qui contribue au vieillissement et au développement de nombreuses maladies. Étudier les voies moléculaires modulant l’induction, le maintien ou l’échappement de la sénescence est compliqué par la contamination des populations de cellules sénescentes par des cellules proliférantes pré- ou post-sénescentes. Pour contourner cette difficulté, nous avons développé un protocole de tri par cytométrie en flux, fondé sur trois marqueurs majeurs de sénescence (l’activité SA-β-galactosidase, la taille et la granularité des cellules), qui permet de trier des cellules sénescentes viables, à des degrés choisis d’engagement dans le phénotype.

Abstract

Cells can be reprogrammed into senescence to adapt to a variety of stresses, most often affecting the genome integrity. Senescent cells accumulate with age or upon various insults in almost all tissues, and contribute to the development of several age-associated pathologies. Studying the molecular pathways involved in senescence induction, maintenance, or escape is challenged by the heterogeneity in the level of commitment to senescence, and by the pollution of senescent cell populations by proliferating pre- or post-senescent cells. We coped with these difficulties by developing a protocol for sorting senescent cells by flow cytometry, based on three major senescence markers : the SA-β-Galactosidase activity, the size of the cells, and their granularity reflecting the accumulation of aggregates, lysosomes, and altered mitochondria. We address the issues related to sorting senescent cells, the pitfalls to avoid, and propose solutions for sorting viable cells expressing senescent markers at different extents.