Les kinétochores libres inhibent la transition M/A. Une cellule en mitose ne commence l’anaphase que lorsque le dernier chromosome s’est positionné sur la plaque équatoriale du fuseau (à gauche). Les protéines du point de contrôle se localisent sur les kinétochores, préférentiellement libres, des chromosomes non attachés ou mono-orientés. Lorsqu’un chromosome acquiert un attachement bipolaire, l’abondance de ces protéines diminue progressivement sur le kinétochore qui dirige le déplacement du chromosome vers la plaque équatoriale. En particulier, Mad2 est indétectable sur les kinétochores des chromosomes déjà alignés. La destruction au micro-laser du dernier kinétochore libre déclenche l’anaphase (voie droite).