Figure 3.

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La paramécie, un modèle d’étude pour les dyskinésies ciliaires primitives (DCP). A. Suivi de la trajectoire de nage des cellules témoins (Ctrl) (A1), ou dont les gènes C11orf70 (A2) ou TTC12a (A3) ont été inactivés, analysée par vidéo microscopie pendant une durée de 10 s, avec une acquisition toutes les 0,3 s. Une projection en Z de toutes les images du film permet d’obtenir la trajectoire. L’espacement entre deux points est directement relié à la vitesse de nage. B.. Quantification de la vitesse moyenne de nage d’une cinquantaine de cellules par condition. Chaque point représente la vitesse moyenne de nage d’une paramécie. Les barres d’erreurs représentent la déviation standard à la moyenne. Test t de Student : **** : p < 0,0001. C. Coupes transverses en microscopie électronique d’un axonème de cil, issues de cellule témoins (Ctrl) ou dont le gène C11orf70 a été inactivé (C2), obtenues après une fixation par glutaraldéhyde/acide osmique. La perméabilisation suivie d’une fixation glutaraldéhyde/acide tannique/acide osmique permet de mieux visualiser les bras de dynéines de la cellule témoin (C3) et de la cellule dont le gène TTC12 a été inactivé (C4). Les flèches indiquent la présence des bras internes et externes de dynéines et les têtes de flèche indiquent l’absence de ces bras (barre d’échelle : 50 nm). D. Localisation des protéines couplées à la GFP (green fluorescent protein), C11orf70-GFP et IFT46-GFP au cours de la reciliation chez la paramécie. Les cellules sont déciliées transitoirement par une solution Ca2+/EtOH. Après lavage en milieu de culture (15 min), les cellules sont fixées et immunomarquées par un anticorps anti-tubuline polyE (rouge) pour observer les cils. La localisation de la GFP (D1), de C11orf70-GFP (D2) et IFT46-GFP (D3) est observée par fluorescence directe (barre d’échelle 20 μm).
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