Figure 2.
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Expression de l’otoferline entière dans des cellules HEK293 en culture après co-infection par une paire de virus AAV recombinants contenant chacun une moitié de la séquence codante. À gauche: représentation schématique des deux vecteurs contenant la partie 5’ (5’ ADNc-otof) ou la partie 3’ (3’ ADNc-erline) de l’ADN complémentaire (ADNc), qui codent respectivement la moitié N-terminale ou C-terminale de cette grande protéine de 1 992 acides aminés. La succession des évènements conduisant à la synthèse de la protéine entière est indiquée: co-infection de la cellule, recombinaison entre les deux vecteurs reconstituant la séquence codant la protéine entière, transcription de cette séquence recombinante en ARNm, épissage de ce transcrit primaire permettant d’éliminer la séquence non-codante intermédiaire ayant servi à la recombinaison, traduction en protéine. À droite: l’otoferline synthétisée par les cellules co-infectées est révélée par une fluorescence verte, grâce à un anticorps spécifique dirigé contre l’extrémité C-terminale de la protéine. Les noyaux des cellules sont révélés par une fluorescence bleue. ITR: inverted terminal repeat ; SD et SA: sites d’épissage donneur (SD) et accepteur (SA) ; polyA: site de polyadénylation du transcrit ; C2A-C2F: six domaines C2 de l’otoferline ; TM: domaine transmembranaire.
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