Principe de sélection des hybridomes en milieu HAT. Les cellules de myélome HGPRT^- utilisées, adaptées à la culture in vitro, ont été sélectionnées à l’aide de la 8-azaguanine (8-aza) de façon à obtenir des mutants résistants à l’aminoptérine car n’utilisant plus la voie alterne de synthèse des nucléotides du fait de l’inactivation de l’enzyme HPGRT (ou HPRT) (hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transférase). La 8-aza, un analogue des purines qui interfère avec la voie alterne, tue en effet les cellules de type sauvage mais les cellules HGPRT^- qui apparaissent à la suite de mutations spontanées résistent à cette drogue. Les cellules de myélome HGPRT^- sont fusionnées à l’aide de PEG avec des lymphocytes B provenant de souris (ou de rats ou de lapins) ou d’individus immunisés ayant développé une réponse anticorps contre l’antigène d’intérêt. Les cellules hybrides (hybridomes) sont sélectionnées en ajoutant de l’aminoptérine dans le milieu de culture. Les lymphocytes B n’ayant pas fusionné sont incapables de survivre et de proliférer in vitro. Les cellules de myélome non fusionnées sont tuées par l’aminoptérine. Les seules cellules qui survivent sont les cellules hybrides qui possèdent à nouveau un gène sauvage codant l’HGPRT provenant du génome du lymphocyte B fusionné.