Analyse cinétique d’un traitement par la GnRH. Les cellules gonadotropes murines LβT2 sont soumises à un traitement par l’agoniste de la GnRH (GnRHa), la triptoréline (Decapeptyl™), à 10 nM pendant 24 h. Le niveau de miR-125b (A) et de miR-132 (B) dans les complexes RISC (RNA-induced silencing complex), permettant d’évaluer la fraction active des miARN, est quantifié par PCR (polymerase chain reaction) quantitative après immunoprécipitation des complexes et est rapportée à la quantité totale de ces mêmes miARN dans la cellule. La quantité de protéines Nsun2 (NOP2/sun family member 2) est mesurée par analyse en Western blot à l’aide d’un antisérum spécifique et rapportée à la quantité de la protéine GAPDH (glyceraldehyde-3 phosphate deshydrogenase) (C) . La fraction phosphorylée de la protéine Nsun2 est mesurée après fractionnement sur colonne d’enrichissement en phosphoprotéines et rapportée à la quantité totale de Nsun2 (D) . Les niveaux des messagers de la sous-unité catalytique de PP1α (protein phosphatase type 1 alpha), Ppp1Ca (E) , de Lhb (luteinizing hormone beta subunit) (F) et Fshb (follicle stimulating hormone beta subunit) (G) sont mesurés par PCR quantitative et rapportés au niveau de l’ARNm codant la GAPDH. Les valeurs moyennes sont représentées ± SEM (standard error of the mean). * : P<0,05 ; ** : P<0,01 ; *** : P<0,001.