Le modèle BCL2^traceur. A. Représentation schématique du module transgénique rétroviral. Un BCL2 transcriptionnellement inactif (inversé et flanqué d’un marqueur cellulaire sous IRES) est bordé de séquences signal de recombinaison V(D)J arrangées en mode inversion (triangles). Sous l’action des recombinases RAG1/2 lors du développement pré-B, le module BCL2 est inversé et placé sous le contrôle transcriptionnel (constitutif) du LTR (long terminal repeat) rétroviral. La recombinaison par inversion est relativement inefficace et se produira dans ~ 1 cellule B sur un million. La séquence formant le joint codant (CJ) est imprécise, et forme une empreinte clonale traçable par PCR. B.  Représentation schématique de la stratégie de stimulation antigénique. Les cellules souches hématopoïétiques (CSH) d’une souris [AID-Cre x ROSA-EYFP] sont infectées par les rétrovirus contenant le module BCL2^traceur non réarrangé, et greffées dans une souris hôte sauvage irradiée. En absence d’immunisation, la fréquence des cellules ayant réarrangé/activé le transgène BCL2 reste de ~10^-6/10^-5 quel que soit l’âge des souris greffées. Une stimulation antigénique répétée (ici par un antigène complexe : les globules rouges de mouton [GRM]) provoque une expansion préférentielle des cellules B BCL2⁺ comparé aux autres cellules B non réarrangées (BCL2^-) au sein des mêmes souris. Les sous-populations B BCL2⁺ et contrôles sont triées par cytométrie de flux et un transfert adoptif effectué dans une nouvelle souris hôte sauvage (pré-immunisée et stimulée avec des GRM). La formation de clusters BCL2⁺ « FLIS-like » est observée au sein de centres germinatifs réactifs par ailleurs normaux. Marquages : EYFP (enhanced yellow fluorescent protein), cellules ayant transité par le centre germinatif et activé la EYFP via AID-Cre. GL7 : marqueur des cellules du centre germinatif. IgD : marqueur des cellules B du manteau entourant le centre germinatif ; hBCL2 : BCL2 transgénique humain.