Figure 2.

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Schéma des différentes étapes du test phénotypique miniaturisé mis au point pour l’identification de composés capables de stimuler la réponse immunitaire innée antivirale. La première étape consiste en un dépôt des composés des chimiothèques disponibles (Tableau I) dans des plaques 96 puits (un composé par puits dans du DMSO). Les colonnes 1 et 12 sont dédiées aux contrôles (négatifs en présence de DMSO seul et positifs en présence d’IFN-b) : les valeurs obtenues pour ces contrôles serviront à calculer le facteur Z’ [27], qui rend compte de la qualité et de la reproductibilité du test sur la base des écart-types et des moyennes des minima (contrôles négatifs) et des maxima (contrôles positifs). Puis, des cellules transfectées de façon stable avec un plasmide portant la construction ISRE-luc (lignée cellulaire STING-37) sont ajoutées dans les puits des plaques (100 µl par puits). Après 24 h d’incubation à 37 °C en présence de 5 % de CO2, le substrat de la luciférase est ajouté dans chaque puits (50 µL Bright-GloTM luciferase assay system, Promega), et incubé à température ambiante 6 minutes. La mesure de luminescence est ensuite réalisée sur un lecteur de plaques multimode (temps d’intégration de 100 ms).
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