Figure 1.

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Les étapes de manipulation des RCPG. Les RCPG (schématisés en bleu) sont des protéines membranaires intégrales et, dans la majorité des cas, sont surexprimés à la membrane plasmique des cellules hôtes (le cas des RCPG produits en corps d’inclusion bactériens ou en systèmes acellulaires n’est pas pris en compte ici). Ils sont extraits de leur environnement membranaire à l’aide de détergents (ici en jaune) au cours d’une étape de solubilisation. À ce stade, les RCPG sont complexés aux lipides (en gris) et aux détergents. Ils sont ensuite purifiés par différentes approches de chromatographie, par exemple par immunoaffinité (anticorps dirigé contre un épitope naturel ou inséré dans la séquence primaire du RCPG) ou via une stratégie IMAC. Au cours des étapes de purification, si les détergents utilisés lors de l’extraction dénaturent le RCPG, un échange de détergents peut s’avérer nécessaire. Enfin, sous forme purifiée, les RCPG sont stabilisés par des surfactants qui maintiennent leurs propriétés fonctionnelles, tels que les détergents MNG (en rouge) ou les amphipols (en vert clair). Ils peuvent également être stabilisés à l’aide de nanodisques (lipides et MSP), structures discoïdales qui constituent un environnement phospholipidique proche de la membrane native. MNG : maltose-néopentylglycol.
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