Mise en évidence par immunofluorescence et microscopie électronique de l’absence d’annulus. A..Immunodétection de la protéine septine 4 sur des frottis de spermatozoïdes montrant l’absence de signal au niveau de l’annulus des spermatozoïdes d’un patient asthénozoospermique ainsi que la désorganisation de la pièce principale. Le noyau est coloré en bleu (DAPI) et le flagelle, la pièce intermédiaire comprenant les mitochondries, est coloré en rouge (Mitotracker). La septine 4 de l’annulus donne un marquage vert dans les spermatozoïdes contrôles (anticorps H-120, Santa Cruz). Des images identiques sont obtenues par immunodétection des protéines septine 7 ou TAT1/Slc26A8, suggérant l’absence de l’annulus. Images a et a’ : spermatozoïdes d’un sujet fertile ; images b et b’ : spermatozoïdes d’un patient infertile présentant une asthénozoospermie modérée. Les images a’ et b’ correspondent à l’agrandissement d’un champ des images a et b, respectivement. Barres d’échelle : a et b = 5 µm ; a’ et b’ = 2 µm. B. L’analyse en microscopie électronique confirme l’absence de l’annulus et révèle une désorganisation sévère de la pièce intermédiaire dans les spermatozoïdes du patient infertile (photographie de droite). Chez le patient, les mitochondries sont de taille irrégulière et ne sont pas alignées en comparaison de celles de l’individu fertile (photographie de gauche). Dans les spermatozoïdes du patient, il existe également une disjonction entre la pièce intermédiaire et la pièce principale se traduisant par une région du flagelle sans mitochondries, ni gaine fibreuse. 1 : pièce intermédiaire ; 2 : annulus ; 3 : pièce principale. Barres d’échelle = 0,2 µm.