Vue schématique du SPIM. A. Le faisceau de lumière provenant de un ou plusieurs lasers est mis en forme (AF = agrandisseur de faisceau, FR = fente rectangulaire ajustable) et focalisé (LC = lentille cylindrique, Obj1 = objectif) pour générer une feuille de lumière dans le plan focal de l’objectif de détection. Un filtre acousto-optique (AOTF) permet de sélectionner la longueur d’onde d’excitation provenant d’une ou de plusieurs sources laser et de contrôler précisément l’exposition de l’échantillon. Le signal de fluorescence de l’échantillon est ensuite focalisé par un second objectif Obj2 puis filtré (F1 et F2) pour être enregistré par un ou deux capteurs matriciels CCD (ou CMOS). Un système laser de photomanipulation (FRAP, photoactivation ou microdissection) peut être utilisé, de manière optionnelle, en parallèle à travers l’objectif de détection Obj2 et focalisé sur l’échantillon. LT : lentille de tube ; MD = miroir dichroïque, MFF = système de mise en forme du faisceau. Les pointillés indiquent les différentes options possibles. B. L’échantillon est en général enfermé dans un gel mou aqueux comme l’agarose et le tout est placé dans une chambre à perfusion (vue en coupe) remplie d’une solution aqueuse (eau, milieu cellulaire) dont on peut contrôler les paramètres physiologiques (température, pH, CO₂). C. Pour l’imagerie en volume, l’échantillon est déplacé par rapport à la feuille de lumière grâce à trois moteurs de translation (X, Y, Z) et un moteur de rotation (θ).