Anomalies phénotypiques des motoneurones issus des cellules CSEh DM1. On observe une augmentation anormale de l’arborisation neuritique entraînant des défauts dans la capacité des motoneurones à interagir avec leur cible musculaire. A. Représentation schématique du protocole de différenciation des CSEh en motoneurones. La première étape de ce protocole se base sur une coculture entre les CSEh et des cellules stromales permettant l’induction neurale. Les précurseurs neuraux ainsi obtenus, sous la forme de rosettes neurales, sont traités par de l’acide rétinoïque ou Sonic hedgehog, deux facteurs connus pour leur rôle dans la différenciation cholinergique. La maturation terminale des motoneurones est ensuite induite, pendant 1 à 2 semaines, en maintenant les cellules en présence de facteurs de survie tels que le BDNF (brain-derived neurotrophic factor), le GDNF (growth-derived neurotrophic factor) et l’acide ascorbique. B. Une proportion (30 %) des neurones (détectés par immunomarquage pour TuJI) expriment le marqueur nucléaire spécifique des motoneurones Hb9 (en rouge). C. Détection par hybridation in situ des inclusions ribonucléoprotéiques (en rouge) au niveau des neurones détectés par immunomarquage pour le marqueur TuJI (en vert). Un exemple est illustré par la flèche blanche. D. La détection du marqueur pan neuronal MAP2 (en rouge) permet de révéler l’augmentation de l’arborisation neuritique dans les cultures neuronales issues des cellules CSEh DM1 par rapport aux CSEh contrôles (E). F. Les neurites des motoneurones DM1 (en vert, marqueur TuJI) se connectent moins bien aux cellules musculaires (en rouge, marqueur desmine) que des motoneurones contrôles (G). La flèche jaune illustre un exemple d’interaction neurone-cellule musculaire.