Détection de la mutation T315I par PCR spécifique d’allèle (PCR-ASO). A. Principe de la PCR-ASO. Cette technique est fondée sur la spécificité de séquence des amorces utilisées pour la réaction de PCR. Pour chaque analyse, la réaction est réalisée en double de manière simultanée, sur l’ADN du patient, en utilisant une amorce « anti-sens » commune et une amorce « sens » dont la séquence terminale est spécifique de la mutation ou de l’allèle normal. En cas de non appariement, la réaction d’élongation par la Taq polymérase ne peut se faire. Ainsi, l’analyse des produits de la réaction après électrophorèse en gel d’agarose permet de visualiser la présence ou l’absence d’un produit d’amplification suivant le couple d’amorces utilisé, permettant ainsi de déterminer la présence ou l’absence, dans l’échantillon d’ADN, de l’allèle muté. B. Cinétique d’évolution d’un clone porteur de la mutation T315I dans le cas de la prise en charge d’un patient atteint de LMC. M0 : diagnostic et mise en route du traitement par interféron et aracytine (INF+Ara-C) ; M6 : mise en route du traitement par IM (six mois après le diagnostic) ; M13 : absence de réponse cytogénétique après 7 mois de traitement par IM. Le diagramme de séquençage ne détecte pas de mutation à M0 mais détecte une double population (séquence normale C et séquence mutée T) à M13. La cinétique d’évolution par PCR-ASO des cellules mutées témoigne chez ce patient d’un enrichissement du clone muté (minoritaire au diagnostic et non détecté par séquençage) sous traitement par IM.