Mesure in vitro des activités de coupure et de religation de la topo I. A. Le système utilisé repose sur l’utilisation d’un oligonucléotide dont la séquence provient d’une région particulière de l’ADN ribosomique de Tetrahymena [32]. Cet oligonucléotide de 37-mer contient un site unique de coupure pour l’enzyme (flèche), est radiomarqué à l’extrémité 3’ du brin scissile (*A) et est incubé avec de la topo I purifiée en présence ou non d’inhibiteurs. Il est possible de mesurer la quantité de complexes de clivage formés, qui est directement proportionnelle à la quantité de fragments de 23 bases libérés après la coupure. Ce produit de clivage est distingué du brin non coupé par électrophorèse en gel dénaturant de polyacrylamide. X : positionnement de la lésion par rapport au site de coupure. B. Exemple de séquestration de la topo I liée à la présence d’ara-C. La substitution d’une cytosine en position +1 par l’ara-C (X) provoque une augmentation de la quantité de complexes de clivage ADN-topo I (comparer les lignes 2 et 4 au niveau du produit de coupure de 23 bases). Cette augmentation est proche de celle observée en présence de camptothécine (ligne 3). Ligne 1 : ADN non coupé.