Induction d’un potentiel de cellule souche hématopoïétique définitive dans les cellules ES. Les cellules ES, maintenues à l’état pluripotent en présence d’une source de LIF (leukemia inhibiting factor), sont transduites avec un rétrovirus codant pour HoxB4 sous contrôle d’un promoteur inductible par la doxocycline. Les cellules ES sont sevrées de LIF, ce qui entraîne leur différenciation en corps embryoïdes. Ceux-ci sont exposés 48 heures à la doxocycline pour induire HoxB4 et transférés pendant 14 jours en présence de cytokines et de la lignée stromale Op9. L’ajout de doxocycline est prolongé. Le potentiel des cellules obtenues après cette phase d’amplification cellulaire est analysé in vitro (test de colonies) et in vivo dans un système de transplantation hématopoïétique à des receveurs irradiés. La moelle et le sang des receveurs sont analysés pour la présence de cellules d’origine de donneur, et la moelle est injectée à des receveurs secondaires irradiés afin de tester la présence, chez le receveur primaire, de cellules souches hématopoïétiques. Il faut noter que l’ajout de doxocycline n’est pas maintenu in vivo, mais est limité aux 14 jours de culture in vitro.