Conversion de la PrP^Cen PrP^Sc in vitro dans un système acellulaire. A. Principe du test. La réaction utilise de la PrP^Sc naturellement résistante à la protéinase K, partiellement purifiée et extraite de cerveaux d’animaux infectés, et de la PrP^C (PrP^sen) marquée au ³⁵S radioactif et obtenue à partir du surnageant d’une culture de cellules transfectées avec une protéine ne pouvant fixer l’ancre GPI. Après incubation de plusieurs heures, le mélange réactionnel est soumis à une digestion par la protéinase K puis à une électrophorèse, qui permet de visualiser la conversion de la ³⁵S PrP^sen en ³⁵S PrP^res. B. Résultats d’une analyse de conversion et de l’effet de barrière d’espèce. Le schéma représente un gel d’électrophorèse. Les protéines PrP^sen de hamster (H) ou de souris (S) sont totalement dégradées par la protéinase K. En revanche, leur incubation avec de la PrP^res provenant de la même espèce induit leur conversion en une forme résistante à la protéinase K, qui migre avec le marqueur de poids moléculaire de 20,9 kDa. On observe que si la PrP^sen est incubée avec la forme résistante d’une espèce différente, sa conversion est fortement réduite : ce phénomène est appelé barrière d’espèce. En l’absence d’incubation avec la protéinase K, les deux formes PrP^sen et PrP^res migrent de façon semblable (28,5 kDa).