Entrée d’un tachyzoïte de Toxoplasma gondii dans une cellule humaine nucléée. Un tachyzoïte de Toxoplasma gondii amorce son entrée dans une cellule d’ostéosarcome humain (lignée U2OS) exprimant la protéine naturellement fluorescente verte (GFP) en fusion avec le domaine transmembranaire d’un récepteur du facteur de croissance PDGFR (GFP-TMPDGFR : green fluorescent protein-trans menbranar platelet-derived growth factor receptor) ciblée à la membrane plasmique. Le parasite exprime une chimère RON2-mc (fusion de rhoptry neck protein 2 et de mCherry-fluorescent protein), localisée dans les rhoptries. Par vidéomicroscopie de fluorescence, RON2-mc permet de détecter les rhoptries apicales, mais également la jonction circulaire établie entre le zoïte et la cellule (jonction zoïte-cellule : JZC) dans la phase initiale de l’entrée, après la sécrétion du complexe RON hétéro-tétramérique (RON2, 4, 5, 8) et l’insertion de RON2 dans la membrane fluorescente de la cellule cible. Une fois le complexe RON assemblé et ancré à la surface de la cellule cible, la JZC sert de porte au travers de laquelle le parasite se propulse activement en forçant l’invagination de la membrane de la cellule cible sous forme de bourgeon enveloppant. Ce suivi en temps réel présente les images prises à deux longueurs d’onde différentes. Il permet d’apprécier quasi-simultanément la fluorescence de la GFP (représentée en gris puis vert) et celle de la mCherry, ainsi qu’un montage combinant les deux fluorescences avec l’image en lumière transmise. Le matériel fluorescent vert issu de la membrane de la cellule humaine restant fixé au pôle postérieur du parasite s’étire sous la forme d’un tube lorsque ce dernier se déplace pour envahir la future cellule hôte. Le tube se rétracte (indiqué par une flèche) lorsque le parasite effectue une rotation (flèche autour de l’axe) qui a pour effet de fermer la JZC. La concomitance des deux évènements suggère une corrélation fonctionnelle alors que la rétraction du tube membranaire atteste de la fermeture de la JZC. Les changements d’orientation des rhoptries au cours de la séquence qui décrit la rotation sont visualisés par des pointes de flèches. Les temps sont indiqués en secondes. Échelle : 5 μm.