Cytométrie spectrale. Les spectres présentés sont obtenus pour une excitation à 488 nm, excepté lorsque cela est précisé. A.  Schéma optique d’un cytomètre spectral (SONY SP6800). B.  Longueurs d’ondes détectées par chacun des canaux du photomultiplicateur (PMT) 32 canaux. C.  Chambre de détection. D.  Spectres de billes fluorescentes excitées par le laser 488 nm (gauche) et 405/ 638 nm (droite). L’axe des abscisses correspond aux longueurs d’ondes, l’ordonnée à l’intensité de fluorescence. La couleur indique la quantité de fluorescence dans chaque canal (rouge, forte ; vert, moyenne ; bleue, faible). Les flèches rouges indiquent le filtre qui masque la lumière du laser 638 nm. E.  Filtre virtuel phycoérythrine (PE) appliqué aux billes. F.  Empreinte spectrale de l’échantillon (S[5λ]) et spectres individuels mesurés (fluorescéine [FITC] en vert, PE en orange et bruit de fond des cellules en violet). Le rectangle gris représente le masque obstruant la lumière du laser 638 nm. G.  Graphiques de gauche : spectres des cellules marquées avec le mélange des anticorps couplés au FITC et au PE. Spectres de références individuels, du FITC et PE, qui seront utilisés par l’algorithme pour la décomposition spectrale. Graphiques de droite : Visualisation des cellules en nuages de points de densité avant et après application de l’algorithme de décomposition spectrale. H.  Identification des cellules auto-fluorescentes à partir de l’échantillon non marqué. Spectres des cellules non auto-fluorescentes (NON AF) et auto-fluorescentes (AF). Utilisation de l’auto-fluorescence comme un paramètre après décomposition spectrale (d’après [11], avec l’autorisation de SONY Biotechnologies Inc).