Effets additifs des facteurs neurotrophiques HGF, CNTF et ARTN sur les motoneurones. A. Schématisation de la compétition de motoneurones embryonnaires (en bleu) pour les facteurs neurotrophiques (en rouge) produits par leurs cibles d’innervation, les cellules musculaires (en orange), selon la théorie neurotrophique. Les motoneurones qui reçoivent suffisamment de facteurs neurotrophiques survivent (en bleu) et les autres sont éliminés (en violet clair) (illustration reproduite avec l’aimable autorisation du Professeur Georg Dechant, université d’Innsbruck, Autriche). B. Isolement de motoneurones. Les prélèvements sont réalisés sur des embryons de souris transgéniques qui expriment la GFP (green fluorescent protein) sous le contrôle du promoteur Hb9 codant un facteur de transcription à « homéodomaine ». Les motoneurones lombaires qui expriment la GFP, sont isolés par tri cellulaire fluorescent (FACS, fluorescent-activated cell sorting) avant leur mise en culture. Le niveau d’expression de la GFP dans les cellules est représenté par un histogramme indiquant le pourcentage de cellules (en ordonnée) en fonction de l’intensité de fluorescence (en abcisse). Les motoneurones apparaissent à droite (MN), les interneurones au centre et les cellules faiblement fluorescentes à gauche. C. Image de microscopie montrant l’enrichissement en motoneurones, pratiquement à l’homogénéité, après l’étape de tri cellulaire. Barre d’échelle 50 μm. D. Immunomarquage des motoneurones purifiés et détection de la GFP (en vert), du neurofilament-M (NF-M, en rouge) et du facteur de transcription à homéodomaine ISL 1/2 (en bleu). Ce dernier atteste de la pureté des motoneurones. E. Les motoneurones isolés sont positifs pour les trois marqueurs spécifiques : CHAT (choline acetyl transférase), SMI 32 (neurofilament-H non phosphorylé) et ISL 1/2, mais négatifs pour les protéines spécifiques d’interneurones comme les facteurs de transcription EN1 (engrailed-1) et CHX 10 (ou VSX2, visual system homeobox 2). F. Criblage des effets de 66 combinaisons de 12 facteurs neurotrophiques sur la survie des motoneurones lombaires. Le diagramme montre les effets de chaque facteur individuel (première rangée de colonnes) et de toutes les combinaisons de facteurs par paires. Les colonnes jaunes indiquent les effets potentialisés des combinaisons (HGF et ARTN), (HGF et CNTF) et (ARTN et CNTF). Le taux de survie est exprimé par rapport aux valeurs obtenues en présence des 12 facteurs réunis (100 %) ou en leur absence (0 %). G. Effets additifs sur la survie des motoneurones des facteurs HGF, ARTN et CNTF combinés par deux ou par trois. HGF : hepatocyte growth factor ; ARTN : artémine ; CNTF : ciliary neurotrophic factor.