Identification de modulateurs allostériques d’un RCPG par une approche de criblage à haut débit. A. Test de criblage allostérique basé sur la réponse en temps réel d’un RCPG. Pour favoriser la découverte de composés allostériques, le composé test est mis en présence d’un ligand orthostérique, de préférence le ligand endogène. Dans chaque puits réactionnel, le lecteur de microplaques enregistre en temps réel le signal émis au niveau basal, le signal après l’addition du composé testé (en général à 10 μM), puis après l’addition du ligand orthostérique à une concentration induisant 50 % de l’effet maximal (EC₅₀). Sont représentés les patrons de réponse d’une sélection de composés tests compatibles avec un agoniste (bleu), un modulateur positif (vert), un modulateur négatif (rouge) ou un composé inactif (noir). B. Contrôles de qualité du criblage à haut débit. Du fait de l’extrême complexité d’un criblage HTS (high-throughput screening) (dimensions biologiques, physiques, robotiques), un paramètre statistique (Z’) a été développé pour mesurer la qualité du test à un moment donné [17]. Ce paramètre, compris entre 0 et 1, décrit la variance entre les signaux bas et les signaux élevés d’un test de criblage, une valeur de 0,5 étant considérée comme compatible avec le criblage à haut débit. Ce paramètre est employé au cours de l’optimisation du test de criblage au format haut débit et, dans le cas présenté ici, comme contrôle de qualité. Les plaques de composés ne satisfaisant pas aux critères de qualité sont à repasser (points rouges). C. Organigramme des étapes précoces de la découverte de nouvelles entités chimiques actives par criblage à haut débit. Le criblage à haut débit permet de tester l’activité d’un grand nombre de composés dans le test unique de criblage, pour ne retenir que la fraction des composés dits actifs. Une fois l’activité et la spécificité de ces composés vérifiées (expériences de réplication et de contre-criblage), un classement des composés d’intérêt par efficacité et par structure chimique est dressé dans le but d’identifier en priorité des composés actifs partageant une structure chimique voisine pour n’en retenir qu’un nombre très restreint (points de couleur). Ces ébauches de relations structure-fonction seront alors approfondies par la synthèse d’une collection de dérivés par famille dont l’activité sera évaluée dans plusieurs tests. Ce travail conduira à la sélection d’une molécule originale dite « tête de série » active dans plusieurs tests fonctionnels secondaires, biologiques et ou phénotypiques, et dotée de propriétés physicochimiques acceptables pour les étapes ultérieures de développement.