Figure 2.
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Le système de contrôle temporel de l’expression génétique « BacteriO’clock » développé par l’équipe. Le but de la construction est de faire en sorte que les trois gènes contrôlés, représentés par les petites ampoules, s’allument ET s’éteignent successivement dans l’ordre 1, 2, 3 selon d’un principe de FIFO (first in, first out). Pour aboutir à ce fonctionnement séquentiel, les trois gènes sont tout d’abord placés sous le contrôle du gène régulateur A, dont le produit possède une affinité de liaison - et donc une force d’activation décroissante - pour les trois gènes : lorsque l’expression de A est déclenchée, celle du gène 1 est la première à être activée et il suffit d’une faible concentration de produit A en raison de la forte affinité ; le gène 3 s’allume en dernier en présence d’une forte concentration de A. Or, si le système en restait là, lors de l’extinction de A, l’ordre de désactivation se ferait alors dans l’ordre inverse 3, 2, 1. C’est là qu’entre en jeu le gène régulateur B, lui-même activé par A, d’où un certain décalage de l’accumulation du produit B par rapport à celui de A. Les affinités de liaison de B pour les trois gènes contrôlés sont, à l’inverse de A, croissantes dans l’ordre 1, 2, 3. En raison du décalage de la (dés)activation de B par rapport à A, l’influence de B joue surtout au moment de l’extinction du gène A en forçant les gènes à s’éteindre dans l’ordre 1, 2, 3. La désactivation de A est due à un rétrocontrôle négatif par le gène 3. Le concept de ce dernier composant a évolué au cours du projet ; son but est de faire osciller le système. À la place d’une inhibition directe de A par le gène 3 se substitue un mécanisme de quorum sensing : le gène 3 activé produit du HSL qui est sécrété dans le milieu externe et qui est simultanément reconnu à la surface des cellules et internalisé. Lorsqu’il est en quantité suffisante, le HSL endocyté active un gène inhibiteur de A et désactive l’expression de ce dernier jusqu’à ce que la dégradation progressive du HSL permette au système de redémarrer. Outre son rôle dans la boucle de rétrocontrôle, le passage par le milieu extérieur synchronise les oscillations de toute une population bactérienne transformée.
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