A. Exemple d’image d’une biopuce à ADN après analyse au scanner. Les ARNm des cellules non stimulées et stimulées par l’AMPc sont comparés et hybridés sur la même lame. Les spots rouges (en double) indiquent les gènes stimulés. La flèche montre les spots correspondant au gène Hif1α en réponse à l’action de l’AMPc. B. Analyses en Western blot de la protéine HIF1α provenant d’extraits de cellules de mélanome B16 après transfection par un ARNsi non pertinent (ARNsi-témoin) et un ARNsi agissant sur MITF (MITFsi). Les cellules sont soit non traitées (NS), soit traitées par la forskoline (FK) ou par du Cobalt (Co²⁺), utilisées comme témoin de l’induction de la protéine HIF1α. La détection de ERK2 montre une charge égale de chaque piste du gel. C. Étude en immunofluorescence de cellules de mélanome transfectées avec un ARNsi non actif (ARNsi-témoin) (en haut) et un ARNsi ciblant MITF (en bas). Les cellules sont soit non stimulées (NS), soit stimulées pendant 24 heures par la forskoline (FK) augmentant l’AMPc. L’expression de la protéine est détectée par un anticorps monoclonal primaire et un anticorps secondaire couplé à la fluorescéine (FITC) (vert). HIF1α est marqué par un anticorps polyclonal et un anticorps secondaire conjugué au Texas Red (rouge) (barre : 20 μM). D. Immunofluorescence des cellules B16 transfectées avec un ARNsi non pertinent (ARNsi-témoin) ou un ARNsi invalidant HIF1α ; les cellules ont ensuite été traitées par la staurosporine (1 μM) pendant 6 heures. La caspase-3 clivée est marquée par un anticorps conjugué au Texas Red (rouge) et la protéine HIF1α est détectée par un anticorps monoclonal et un anticorps secondaire conjugué au FITC (vert) (barre : 20 μM).