Principe du FRET (fluorescence resonance energy transfer). A. La molécule « donneur » porte un fluorochrome dont la longueur d’onde d’émission correspond à la longueur d’onde d’excitation du fluorochrome placé sur la molécule « accepteur ». La molécule « donneur » présente un domaine susceptible de se lier spécifiquement à un domaine de la molécule « accepteur ». Lorsque les conditions biologiques sont favorables, ces deux molécules interagissent, permettant le rapprochement des deux fluorochromes. Si les paramètres de distance et d’orientation (géométrie) entre les deux fluorochromes sont corrects, un transfert d’énergie pourra se produire et conduire à des modifications analysables de la fluorescence (voir texte). B. Profil caractéristique d’une expérience de FRET. Entre t0 et t1, les deux molécules fluorescentes n’interagissent pas et émettent chacune leur fluorescence propre, verte pour l’une et rouge pour l’autre. Au temps t1, sous l’effet d’une stimulation, les deux molécules vont interagir et le phénomène de transfert d’énergie conduit à la diminution de l’intensité de fluorescence du donneur (tracé vert), parallèlement à l’augmentation de l’intensité de fluorescence de l’accepteur (tracé rouge). La mesure du rapport d’intensité des deux fluorochromes (ratiométrie, tracé noir) est également représentée. Au temps t2, l’interaction entre les deux molécules est interrompue (présence d’un compétiteur, par exemple) et le transfert d’énergie disparaît.