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Figure 3.

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Remodelage d’un noyau de cellule ES (R1) après injection dans un ovocyte de souris énucléé au stade métaphase II de la deuxième division de méiose et embryon au stade blastocyste obtenu in vitro 4 jours après l’injection. A. État du noyau 15 min après injection à l’état de métaphase; la cellule donneuse a été lysée dans la pipette d’injection juste avant le transfert, et seuls les chromosomes alignés sur la plaque métaphasique (4n chromatides) associée au fuseau mitotique (vue équatoriale) ont été injectés. B. État du noyau une heure après transfert, juste avant l’activation de l’ovocyte; la chromatine est encore en interphase et le fuseau a commencé une rotation qui va le placer perpendiculairement à la membrane plasmique; les fragments de chromatine dispersés (flèches), fréquemment observés à ce stade, pourraient être à l’origine des taux élevés d’arrêts précoces du développement. C. État du noyau 6 heures après activation: les deux lots de chromosomes mitotiques (équivalent chacun à 2n chromatides) viennent d’entrer en interphase et sont en fin d’isolement au sein de deux cellules de taille très différente (division asymétrique) encore reliées par un pont de microtubules; la cinétique des remaniements est très voisine de celle observée après fécondation in vitro. Fixation paraformaldéhyde 2,5 %; coloration de l’ADN à l’iodure de propidium en rouge; détection des microtubules en immunofluorescence indirecte en vert (anticorps primaire, anti-α tubuline de souris; anticorps secondaire, anti-Ig de souris couplé au FITC). D. Embryon au stade blastocyste : l’ADN du noyau (n≈55) a été coloré à l’iodure de propidium. Barres d ’échelle: A-C, 20 µm; D, 40 µm.

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